基因組框架圖和精細圖有什么不同?
框架圖能覆蓋基因組常染色體區域90%,覆蓋基因區域95%,Contig N5到5 kb,Scaffold N50達到20 kb,單堿基錯誤率在十萬分之一以下。精細圖能覆蓋基因組常染色體區域95%,覆蓋基因區域98%,Contig N5到20 kb,Scaffold N50達到300 kb,單堿基錯誤率在十萬分之一以下。
動植物基因組從頭測序時為什么需要構建不同類型的文庫?
因為動植物基因組大、復雜度高,且存在大量的重復區域,因此需要制備不同梯度的測序文庫,進行雙末端測序,使得在拼接中能夠跳過大范圍的重復區,從而避免了基因組中重復序列造成 的錯拼,提高了拼接的質量;同時結合BAC或Fosmid文庫以及多種測序平臺的綜合運用,保證了測序的準確性和基因組的完整性,從而完成高等動植物的基因組圖譜繪制。
在動植物基因組從頭測序中,不同測序平臺分別有什么優勢?
以Illumina 為代表的二代測序平臺,具有測序數據量大,成本低,可以為基因組測序提供高覆蓋率的數據的優勢。但是該平臺存在讀長短、具有 GC 偏好性等特點,難以跨過重復序列區域和高 GC 含量的區域。以PacBio 公司的RS II和Sequel 平臺為代表的三代測序平臺,具有讀長長(平均reads 長度 > 10 kb)、測序速度快(運行時間短,單個SMRT Cell的運行時間為2~6 hour)、通量高(平均每個 SMRT Cell 產生~8G有效數據)、無 GC 偏好性、能檢測堿基修飾信息(包括甲基化修飾)、無 PCR 偏向性(不需要經過 PCR 擴增,避免測序覆蓋的不均一性)等特點,尤其適合動植物基因組的從頭測序。根據物種基因組的特點及復雜程度,派森諾生物會科學地設計測序實驗方案,合理地將多個平臺搭配在一起使用,既能解決復雜基因組的測序難題,保證基因組測序的質量,同時也能兼顧實驗項目的經濟性。