2019-06-19
文(wen)案 | 轉錄調控事業部
隨(sui)著現代(dai)生物學的發(fa)展(zhan)，以組織或細胞群(qun)為研(yan)(yan)究對象(xiang)，分析多種細胞的平均基因表達(da)水平已(yi)經(jing)不能滿足科研(yan)(yan)需求。單細胞轉錄組測序(xu)(Single cell RNA sequencing, scRNA-seq)是指在單個細胞水平對其mRNA進(jin)行(xing)高通量測序(xu)的一(yi)項新技術，原理是將分離的單個細胞中微量的mRNA通過擴(kuo)增后再進(jin)行(xing)高通量測序(xu)。單細(xi)(xi)胞(bao)轉錄組測序能夠(gou)有(you)效(xiao)解決組織(zhi)樣本細(xi)(xi)胞(bao)異質(zhi)性以(yi)及被常規RNA-seq掩蓋的(de)細(xi)(xi)胞(bao)群內(nei)的(de)轉錄組異質(zhi)性難題，有(you)助于發現(xian)新(xin)的(de)稀有(you)細(xi)(xi)胞(bao)類型，并深入了解細(xi)(xi)胞(bao)生長過(guo)程中的(de)表達調控機(ji)制。
值此(ci)派森諾成立8周(zhou)年之際，聯合10x Genomics推出單細胞轉錄組整體解決方案(an)。
基于10x Genomics ChromiumTM系統，利用油包水的微反應體系，通過序列標簽（cell barcode和UMI）區別群體中的不同細胞和轉錄本，獲得單細胞水平的基因表達譜，可實現數千甚至上萬個單細胞群體分析，解決常規scRNA-seq方法在通量或擴展性方面存在的不足，為單細胞研究開拓新的思路。
派森(sen)諾優(you)勢
01 實驗周期短
派森諾的技術人員，6分(fen)鐘(zhong)內快速完成上萬(wan)個細(xi)胞(bao)封裝，一天內完成80000個細(xi)胞(bao)的細(xi)胞(bao)懸(xuan)液制備、單(dan)細(xi)胞(bao)捕(bu)獲、擴增(zeng)以(yi)及建庫整(zheng)個過程(cheng)。
02 捕獲效(xiao)率高
可使單(dan)個(ge)細胞捕(bu)獲效率(lv)高達(da)65%，真實再現細胞的RNA表(biao)達(da)情況。
03 專業分析快(kuai)
派森(sen)諾的(de)單細胞生信分(fen)析團(tuan)隊(dui)，從(cong)數(shu)據(ju)下(xia)機只需短(duan)短(duan)幾天，即可完(wan)成全部分(fen)析內容，售后服(fu)務貼心。
04 項目經驗多(duo)
多次成功(gong)完成動物(wu)細(xi)胞、植物(wu)細(xi)胞的單細(xi)胞測序；強勢推動腫瘤(liu)細(xi)胞異(yi)質(zhi)性、免疫細(xi)胞群體(ti)檢測以(yi)及胚胎發育等研究。
技術原理
10x Genomics儀(yi)器小巧，但(dan)功能(neng)強大(da)，具(ju)有通(tong)量高、靈(ling)活性強、流(liu)程(cheng)簡單、技術性能(neng)高、單個(ge)細胞制備成本低等優勢，其技術核心是油滴包裹(guo)的凝膠珠(GEM)，該系統(tong)有75萬種barcoded beads，每個(ge)bead上有40-80萬探針。
利用8通道的(de)微流體“雙十字(zi)”交叉系統，將含barcode的(de)凝膠(jiao)珠（Gel Beads）、細胞和(he)酶的(de)混合(he)物、油三者混合(he)，形成GEMs。
GEMs形成后，細胞裂(lie)解，凝膠珠(zhu)自動溶解釋放大量barcode序列，隨后mRNA逆轉錄產生帶有Barcode和UMI信息的cDNA，再構建標準測序文庫(ku)。
建庫(ku)流程
油滴破碎(sui)，cDNA為模板進(jin)行PCR擴增，然后進(jin)行cDNA打斷(duan)、加(jia)測(ce)序(xu)接頭P5及測(ce)序(xu)引(yin)物R1等傳(chuan)統二代(dai)測(ce)序(xu)的(de)建庫過程單(dan)細(xi)胞(bao)轉錄組(zu)測(ce)序(xu)
10x Genomics單細胞轉錄(lu)組(zu)測(ce)序分析內容展示
01 分析流(liu)程(cheng)
02 聚類分析(xi)
03 差(cha)異分析和富(fu)集(ji)結(jie)果
10x Genomics單(dan)細(xi)胞轉(zhuan)錄組測序樣(yang)品要求
派森諾提(ti)供攜帶10x Genomics一起上門(men)建庫服(fu)務，由于10x Genomics對樣(yang)本要(yao)求較(jiao)高，各位師生可以提(ti)前樣(yang)品檢(jian)測：
樣品總量：細胞懸浮液，一個樣本細胞起始量約 5x105個；
樣(yang)品(pin)濃度(du)：7x105—1.2x106/ml；
細胞活性：活細胞數在 80% 以(yi)上(shang)；
細胞(bao)大小：小于 40 μm；
細胞培養基及(ji)緩沖(chong)液(ye)不能含有 ;Ca2+ 和(he) Mg2+ 等影響酶活(huo)性的物質；組織一般需要新鮮標本，不可冷(leng)凍，植物細胞需制成(cheng)原(yuan)生質(zhi)體。
小貼(tie)士
1.樣品來源可(ke)以是(shi)動物、植物等(deng)，組織和細(xi)(xi)胞都需要優化方案確保細(xi)(xi)胞解(jie)離成單細(xi)(xi)胞；
2.建議的洗滌方案是用(yong)含(han)有0.04% BSA的1X PBS來(lai)沉淀和重懸細胞兩(liang)次(ci)；
3.建議(yi)使用寬槍(qiang)頭重懸。 ?
派森諾成立8周年，初心不(bu)變，始終以嚴謹的(de)科學態度，成熟的(de)測序技術，貼心的(de)產(chan)品服務，和廣大師生共同探索科研之(zhi)路。
