腸道是人體重要的消化器官，組織結構由內向外分為粘膜層，粘膜下層，肌層和固有層。這些不同的組織結構在消化、營養吸收、代謝和免疫調節中發揮著不同的作用。目前單細胞測序技術的飛速發展，為解析腸道細胞的異質性、揭示腸道疾病機制提供了強大的工具。今天，小編就來為大家分享腸道組織樣本的解離方案，助力您的單細胞研究！

一、解離方案

1.樣本處理

取出的腸道組織立即放入預冷的PBS中，縱向剪開，用預冷PBS清洗腸道內容物。然后轉移至新的PBS中，在沖洗一遍，放入組織保護液中。

2.組織解離

配置兩種酶液：

酶液Ⅰ：PBS+10mM EDTA+10mM HEPES

酶液Ⅱ：DMEM+1mg/ml 膠原酶Ⅱ+1mg/ml 膠原酶Ⅳ+20U/ml DNAse Ⅰ

首先使用酶液Ⅰ在37度水浴鍋中消化15min，然后使用100um 濾膜過濾，此時過濾后的懸液大部分都是上皮細胞，然后濾膜上的組織再次使用酶液Ⅱ進行消化，37度消化30min，然后使用100um 濾膜過濾。兩步過濾后的懸液合并，4度離心，300g 5min。

3.紅細胞裂解

離心后棄上清，加入3ml紅細胞裂解液，冰上裂解5min，使用DMEM+1%FBS 終止裂紅，使用30um 濾膜過濾，4度離心，300g 5min。

4.清洗

棄上清，使用DMEM+1%FBS清洗，4度離心，300g 5min。

5.質檢

棄上清，使用合適體積的DMEM+1%FBS重懸，AOPI計數，臺盼藍鏡檢細胞狀態及碎片情況。

二、常見問題及解決方案

1.腸道樣本線粒體基因占比高怎么辦？

通過使用美天旎去死細胞磁珠去除可能正在凋亡的細胞

2.腸道微生物污染怎么辦？

腸道微生物較多，可在解離前多沖洗幾遍，后續解離中加抗生素

三、結果展示

活率：91.54% 濃度：1270個/ul 總細胞數：63.5萬

活率：96.93% 濃度：995個/ul 總細胞數：15萬

活率：89.25% 濃度：1080個/ul 總細胞數：54萬