2025-09-12
在植物單細胞測序研究中，獲取高質量的細胞核是后續實驗成功的關鍵前提。相較于原生質體分離，植物樣本抽核技術能突破細胞壁堅韌、組織纖維化等限制，適用于更多難解離的植物組織（如木質化莖稈、成熟種子），且能有效保留細胞異質性。今天，我們就從抽核方法，常見問題與解決方案，全方位分享植物樣本抽核的實戰經驗，幫你避開科研 “坑點”。
派森諾單細胞平臺已成功完成5000+單細胞樣本測序，有著豐富的項目經驗，以下是部分派森諾曾做過的植物組織抽核樣本類型：
一、抽核方案
1. 樣本處理
凍存的植物組織在液氮中研磨成粉末狀，轉移至5ml管中備用。
2. 細胞核釋放
加入3ml NIB裂解液，使用組織研磨儀磨碎組織，使細胞核釋放，DAPI觀察細胞核釋放情況。
3. 清洗
使用NB溶液終止細胞核裂解，離心（根據不同組織類型調整離心力,范圍在500-1000g）,5min。
4. 去雜質
通過流式分選DAPI陽性的細胞核，進行去雜質處理
5. 質檢
流式分選后的細胞核離心，合適體積重懸后使用AOPI染料計數，熒光顯微鏡觀察細胞核完整度。
二、常見問題與解決方案
1. 細胞核破裂率超過 20%怎么辦？
研磨時減少時間（如從 5min 縮短至 3min），或更換為玻璃勻漿器（力度更溫和）；
降低離心轉速（如從 1000×g 降至 800×g），延長離心時間（從 10min 增至 15min）。
2. 細胞質 / 雜質污染嚴重怎么辦？
增加過濾次數（如先用 70μm 篩網初濾，再用 40μm 篩網精濾），并確保每次過濾后用 NB 沖洗篩網；
在 NIB 中加入 2% PVP（去除酚類雜質）
三、部分結果展示
楊樹根尖
楊樹葉片
楊樹莖
棉花根
柳樹葉片
