2025-09-09
從人源樣本到模式生物小鼠，前兩期的單細胞解離技巧已幫大家避開不少坑；這一期，我們專門聚焦畜禽領域，拆解牛、羊、豬等動物組織的解離難點與解決方案！
派森諾單細胞平臺已成功完成5000+單細胞樣本測序，有著豐富的解離經驗，以下是部分派森諾曾做過的畜禽動物組織樣本類型：
一、先搞懂：畜禽動物組織解離的 3 大核心難點
不同于小鼠、人等模式生物，畜禽動物樣本的解離難度往往更高，主要集中在這三點：
1. 個體差異顯著：同一動物不同組織、同一組織不同生長階段、不同品種的細胞密度、間質成分差異巨大，方案可重復性挑戰大。
2. 結締組織豐富：肌肉，真皮等組織纖維粗大，常規酶液難以滲透，導致細胞很難解離出來。
3. 雜質污染風險高：腸道、皮膚、乳腺等組織易攜帶細菌、飼料殘渣、毛發等雜質，若解離時處理不當，會導致后續測序數據中雜菌序列占比超標，浪費成本。
二、實戰指南：我們的經驗合集
我們從上百個實戰項目中，提煉出了這份寶貴的經驗合集：
三、避坑寶典：常見問題及解決方案
1. 酶解時間過長：細胞活性驟降
解決方案：采用 “定時取樣觀察法”—— 孵育 20min 后，取少量組織用顯微鏡觀察，當 80% 組織塊分散成小團（而非完全單個細胞）時，立即加入含 10% FBS 的培養基終止反應（FBS 可抑制酶活性）。
2. 肌肉組織纖維殘留：堵塞測序芯片
解決方案：采用 “二級過濾法”—— 先用 100 μm篩網過濾去除大塊纖維，再用 40μm 細胞篩過濾殘留細絲；若仍有纖維，可加入 0.1% 的膠原酶再次孵育 5min（溫和去除殘留纖維）。
四、部分項目經驗展示
雞胚胎性腺
活率：98.74% 濃度：959個/ul 總細胞量：95.9萬
雞卵黃囊
活率：99.55% 濃度：960個/ul 總細胞量：76.8萬
綿羊胃上皮
活率：94.5% 濃度：1210個/ul 總細胞量：60.5萬
綿羊肺
活率：94.63% 濃度：947個/ul 總細胞量：94.7萬
豬肺
活率：96.63% 濃度：1250個/ul 總細胞量：125萬
豬脾
活率：99.14% 濃度：1350個/ul 總細胞量：67.5萬
豬海馬體
活率：91% 濃度：1410個/ul 總細胞量：28.2萬
豬顱骨
活率：87.5% 濃度：934個/ul 總細胞量：74.7萬
鵝胸腺
活率：98.56% 濃度：1500個/ul 總細胞量：150萬
